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친밀도에따른피부의세균분포와세균진화과정에대한연구보고서.pdf


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임상의학연구부 학술논문

 

 

 

친밀도에 따른 피부의 세균 분포와

세균의 진화과정에 대한 연구보고서

Distribution of bacteria on skin by intimacy and,

A Study on the Evolution of Germs

 

 

 

 

 

20174

 

 

 

국립암센터 임상의학연구부

김의현

 

 

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논문제목 : 친밀도에 따른 피부의 세균 분포와

세균의 진화과정에 대한 연구보고서

 

저 작 자 : 김의현 ()

제 출 일 : 2016416

 

국립암센터 임상의학연구부

 

 

 

 

국문초록

 

 

 

친밀도에 따른 피부의 세균 분포와

세균의 진화과정에 대한 연구보고서

 

 

 

 

 

17기 연구팀 /11년도,06, 08

서울암센터 피부와 조직 문헌 70p,82p,102p 참고

기증 고유넘버 01-223, 01-224, 01-255

연구지원팀 김의현 발췌

 

 

 

연구목적: 접촉성 피부염의 새로운 변이형태로 두 가지 세균이 검출되었다. Petrotobaek the bacteria (이하 페트로토바이크)의 대표적인 특징으로는 세포핵의 구성요소가 독립적인 모습을 갖춘다. 미토콘드리아 역시 세포핵에서 나와 독립적으로 개별 핵을 이루고 있다. 보통의 세균은 원핵생물의 특징을 그대로 가지고

 

 

 

 

있으며 핵막이나 미토콘드리아, 엽록체와 같은 구조를 가지고 있지 않다. 지금까지 보지 못했던 F-mila(자가 규제번식) 방식으로 번식을 더 활발하게 이루는 세균이다.

페트로토바이크는 세포벽에 있는 펩티도글리칸이 사람의 표피와 닿으며 융합일체현상으로 만들어진 세균이다. 일시적인 융합형태로 만들어진 페트로토바이크균은 접촉에 의해 증가하며 진화한다. 많은 타인들을 접촉하며 할수록 증폭되며 유지되는 페트로토바이크균과 달리 Brictrobaek the bacteria(이하 브릭트로바이크) 는 같은 페트로토바이크균의 상태에서 접촉이 저하될 때, 일체현상이 분리되며 브릭트로바이크균으로로 퇴화하게 된다. 하지만 퇴화된 브릭트로바이크균은 다시 접촉이 원활하게 진행될 때 다시금 페트로토바이크로 또다시 변모하게 된다.

 

즉 없어지지 않고 꾸준히 F-milahermaphrodite의 방식으로 스스로의 상태를 바꾸는 세균의 집단인 것이다. 또한 브릭트로바이크균에 있는 세토콘드리아는 미토콘드리아와 비슷한 구조이지만 세포분열이 일어나면서 약간 좁고 길쭉한 모향으로 변함을 확인 할 수 있다. 역시 독립된 개체를 가지며 여기서 세토콘드리아는 페트로토바이크에서 볼 수 있는 Cell line와 비슷한 역할을 가진다.

두 가지 세균모두 세포핵을 가지고 있으며 변모할 때 세포핵은 또다시 변이된다.

이 변이되는 세균들의 억제 가능성을 알아봄으로써 연구의 목적은 시작된다.

 

 

 

 

 

연구 재료 및 방법: 그람염색법을 통해 PetrotobaekBrictrobaek의 세균을

그림염색법 ,공초점미경을 사용함으로써 시각분석법으로 확인하여 세균의 서식 피부 분포 형성에 있어 세균의 작용원리와 후생처리를 확인하였다.

 

 

결과: 펩티도글리칸을 가진 이 두 가지 세균들은 방법으로 제시한 그람양성균에 속하는데, 2차로 가해지는 C-at 융합일체현상으로 페니실린에 의해 억제되지 않음의 delta 감염 증명을 실험과정을 통해 확인하였다.

 

주요어: F-mila, Petrotobaek, Brictrobaek, 피부변이, delta감염,

뤼미브르의 BTI(Bacteria Tessellated Interaction)

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

목 차

 

 

 

열람동의서

 

국문초록

 

주요어

 

서론

 

실험도약과 2차 계산법

 

1. Petrotobaek Brictrobaek의 변모현상

2. C-at 융합일체현상

3. 뤼미브르의 BTI(Bacteria Tessellated Interaction)

 

실험결과 및 고찰

 

1. 억제반응의 a요인과 자기확산

 

< 참고문헌 >

 

 

 

 

 

 

 

 

I. 서론

 

 

 

 

Petrotobaek the bacteria Brictrobaek the bacteria의 분포에 따라서 친밀도로 나누게 된 요인은 생각보다 간단하다. 두 가지 세균이 분포된 위치 그리고 뒤따라 발열되는 신체의 온도가 치밀하게 UNT 반응으로 기록된다는 것이다. 잠식기간은 보통 3개월에서 ~ 2년이며 sepsis와 비슷한 발열지점으로 한번 발열되기 시작하면 피부는 조금씩 열에 의해 괴사과정이 시작된다. 과거 비슷한 인자로 비교하자면 Methicillin-resistant Staphylococcus aureus, 이하 MRSA 이후의 비슷한 내성인자로 볼 수 있는 것이다. 페니실린(메티실린, 디콜록사실린, 납실린, 옥사실린 외)과 세팔로스포린을 포함한 β-락탐계 항생물질에 내성을 획득한 황색포도상구균은 MRSA가 된다.

 

 

 

 

 

 

주요 원인은 기후요인에 진화한 세균성 발열증후군의 시작으로 1차 보고는 2014 아르헨티나 디아이 섬에서 그 실체가 처음으로 확인되었다. 발생환자는 13세의 여아로 발열로 인하여 감기로 추측한 부모의 병원방문이 오히려 병원균으로 전염, 확산되었다고 한다.

이후 3년인 지금 한국에서도 보고되었고, 기증자 (기증 고유넘버 01-223, 01-224, 01-255 )의 도움으로 연구를 해보았지만 결과는 참혹하였다. 하지만 뤼미브르의 BTI 계산법으로 감염예상 표피에 퍼지는 Petrotobaek the bacteria, Brictrobaek the bacteria 균의 개수를 인지하고 검열진동감지기(GOGP)를 사용해 확산을 늦추는 방법이 있다.

세균이 모두 분비하는 Elenat(Et)의 영향으로 가속도를 가지게 되었으며, 이후 연구는 이동 Plastic bag을 만들기 위해 3차 연구를 진행 중이다.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

II 실험요약과 2차 계산법

 

 

1. Petrotobaek Brictrobaek의 변모현상

 

 

세균 배양 : Testoban (Petrotobaek the bacteria에서 추출된 기관)Atidium (fimalet opemtmail ,onpamasei bearcigot)에서 배양하고, Cellenia (Brictrobaek the bacteria에서 추출된 기관) 0.3추출하여 Tinapoli (bogosp , hagisilta)에서 배양하였다. 역시 접촉 부위에 따라서 확산 속도가 다른 것을 확인하였다. Testoban 의 조직에서 발견된 나선균 (NOS)을 배양액 (ATCC

medium 1494)배지에 배양하였으며 두 가지 균들은 5% H2,10% CO2,85% N2인 기성 조건 37에서 2-4일간 배양했다.

 

변모 현상 : E-ORIS(5Zone)발견

pipter C-at 억제반응의 목적으로 사용하다. UNT반응이 일어났다.

ronnder dopoy ral 방법을 따라 합성하였다. 또한 이 합성물을 Pap분법으로 정제하였다. 친밀도에 따른 접촉성 세균임을 E-ORIS(5Zone)발견으로 확인하였다.

 

 

fig.1)E-ORIS(5Zone)의 구축단계 친밀도와 접촉에 의거한 과정임을 확연히 보여준다.

 

 

2. C-at 융합일체현상

 

세균막 형성 일체 (Biofilm combination)

Testoban의 세균 부유액 1을 유리 슬립이 포함된 24-wellplate에서 72시간 배양하다. F.nucleatum1x10 7 /, Testoban4x10 7 /로 단일

종과 혼합종 모두에서,커버슬립에 생성된 세균막은 10% crystalviolet

으로 10분간 염색했으며 PBS로 세 번 씻어내었다.

 

 

 

fig.2) 세척전과 이후의 반응의 균

fig.3) 융합일체현상이 되는 과정의 사진

 

다시 1acetone-alcohol(20:80,vol/vol)용액으로 탈염색했다. 이 탈염색된 용액의 흡착도는 microplatereader(a Wallac Victor3microtiter,PerkinElmerLife

Sciences,Waltham,MA)를 이용하여 595nm에서 측정하다.

다른 실험으로 세균막이 형성된 슬립들을 Live/Dead-BacLight

bacterialviabilitykit(Invitrogen,GrandIsland,NY)를 이용하여 염색

하으며 ,공초점 현미경(Olympus FV300,Japan)을 이용하여

1,000배의 배율로 관찰하다가 C-at(융합일체현상)을 발견하였다.

 

 

3. 뤼미브르의 BTI(Bacteria Tessellated Interaction) 세균 계산 공식법

 

 

신체에 퍼진 세균의 분포도를 측정하는 계산법이 있다. 해당 부위에서 서식하는 세균들의 종류와 평균치를 선상에 놓고 접촉이 일어나는 시점마다 1 bti을 더한다. 여기서 bti1996년 프랑스의 국립의학연구소(INSERM)의 뤼미브르박사에 의해 정해진 세균의 집합을 뜻한다. 하지만 두 자릿수에서는 세균의 구조에 따라 수치는 변증법처럼 증가한다. 세 자릿수 역시 이와 비슷하게 미지수제곱의 제곱을 곱하는 형식이다. 이 형식을 쉽게 나열하면 아래와 같다.

 

 

 

1번의 접촉 (1~9) 한자리수 단계 + 1bti

10번의 접촉 (10~99) 두 자릿수 단계 + 1(X^2) + 1bti

100번의 접촉 (100~999) 세 자릿수 + 1(X^2+ X^2)+ 1bti

1000번의 접촉 (1000~9999 네 자릿수 + 1(X^2+ X^2+X^2)+ 1bti ...

 

 

이때 접촉이라고 할 수 있는 정의의 전제는 사물의 매개도 포함하며, (공공사물, 핸드폰 등의 여러 사람과 매개가 될 수 있는 모든 사물을 일컫는다.) 국립암센터에서 지급하는 검열진동감지기(GOGP)에 감지된 접촉만을 허용한다.

앞서 나열된 계산법으로 측정된 피 실험자 AB (기증 고유넘버 01-223, 01-224, 01-255 )의 표피를 측정 해 보니 오차범위는 0.5%의 확률로 95% 일치하였다.

 

 

 

실험결과 및 고찰

 

 

1. 억제반응의 a요인과 자기확산

 

 

 

백신 (페니실린)의 영향을 받지 않는 Petrotobaek, Brictrobaek는 병원균에 의해 진화함을 알 수 있고, 이 병원균을 억제하기 한 많은 시도들이 있어왔다. 하지만 이 두 가지 세균내에 상주하는 공생 세균 madlia를 제거하는 것에는 많은 어려움이 따른다. 이것이 가장큰 억제불가능의 a요인이라고 둔다.

우리는 FunktumParta가 단독 배양 시보다 공생 배양 시에 세균막의 형성이 더 잘 일어난다는 것을 확인할 수 있었고, 한편으로는 TestobanSetochondria사이의 세균막의 형성과 응집은 억제인 furanoneD-ribose에 의해 해제되지 않는다는 것 역시 볼 수 있었다.

Testoban기관은 두 종류의 세균간의 변모현상에 있어서 아주 요한 역할을 담당하고 있으며, 연쇄상구균인 Streptococcusgordonii의 비슷한 구조를 가진다는 것을 확인하였다. 그러나 이번 실험의 한계는 F.nucleatum의 자기확산 반응에 따라서 체결된 것이니 다른 세균 종에 관하여서도 더 밝혀져야 할 것이다

 

 

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